基因的同源重组是由重组酶介导的、发生在相同或相近的两条DNA链之间的链交换,对于维持遗传稳定性和生物多样性具有重要意义。同源重组现象的发现已有几十年历史,同源识别和链交换是同源重组过程中最重要的步骤,但由于其反应中间产物停留时间短并且状态复杂,常规方法难以捕捉,因而其分子机理仍十分模糊。
最近,中国科学院物理研究所/北京凝聚态物理国家研究中心软物质实验室SM4组的徐春华副研究员、陆颖副研究员以及黄星榞博士等,运用单分子磁镊和荧光成像技术,通过巧妙的实验设计,捕捉到同源重组链交换的中间态,在体外再现了链交换的步进过程,并推测出过渡态结构的存在,建立了RecA介导的同源重组的行波模型,阐述了同源重组中序列识别和链交换的分子过程。
作为重组酶的代表,RecA几乎能够独立完成同源重组中的链交换过程。RecA介导的同源重组可简略描述为:发生双链断裂的DNA末端在相关蛋白的作用下,形成3-1单链突出,这段单链可以被RecA缠绕形成螺旋丝状结构(核蛋白丝nucleoprotein filament); 核蛋白丝入侵到双链DNA中,搜寻与之同源的序列并发生链交换。
核蛋白丝中的入侵链(I链)替换同源双链DNA中的被替换链(O链),与互补链(C链)形成新的双链。
在研究中,他们意识到链交换反应的中止或许能够体现出中间态的信息,从而得到更多链交换反应的细节。因此,研究人员设计了一系列包含不同错配碱基的DNA,从单分子尺度上观察链交换反应的动力学现象。他们意外地发现链交换的终点竟然不在界面(错配序列与同源序列的交界处定义为界面),而是被完全错配序列阻挡于界面之前9 bp的位置。
通过磁镊和FRET实验,研究人员还测量了链交换和同源序列比对的步长,他们发现虽然3 bp仍然是链交换的基本单位,但同源序列比对与链交换的步长都更倾向于以3 bp的整数倍发生,最概然的步长均为9 bp。同时,前面提到的过渡结构也为9 bp。结合实验和理论,研究人员建立了一个链交换模型,在这个模型中链交换过程像行波一样推进。